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一、 实验仪器与试剂
表格一：实验仪器
仪器
厂家
型号
细胞培养箱
Thermo Scientific
HERA cell CO2
低温高速离心机
64R
BECKMAN
流式细胞仪
BD
FACS Calibur
表格二：试剂
试剂
厂家
DMEM 培养液
Hyclone
PI
Sigma
PBS 7.4 (0.1 M)
自配
乙醇
国药集团
RNA 酶
Sigma
二、 实验步骤
细胞培养 取对数生长期的 A172 细胞，按 1*105个/mL 以 1mL 体积接种于 6 孔板内。无抗生素培养液培养过夜,到转染时使细胞达到 70％的汇合率。
转染
将 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM 中,混合均匀。
将 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM 中，混合均
匀。在室温下孵育 5 分钟。
将上述两种混合物混合（总体积 800uL）,轻轻混合均匀在室温下孵育
20 分钟形成复合物。
在 6 孔板中每孔加入 800uL 复合物。十字法混合均匀。
细胞在 37℃、5%CO2培养箱中培养 6h 后弃上清液,并加入 10％胎牛血
清的 DMEM 培养液。
固定
培养 48h 后小心吸去上清，胰酶消化并离心收集细胞（1000rpm/min），弃上清，用预冷 PBS 洗细胞 2 次，加入预冷 70％乙醇， -20℃固定保存。
染色
离心，弃上清；
1mL PBS 洗 1 次，离心；
加入 10uL RNase A（20ug/mL）于 500uL PBS, 37 度 30min 孵育后，离心；
PBS 洗 1 次，离心；
加 10uL PI (50 ug/mL)于 500 uL PBS，室温避光 30min。
检测
以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长 488nm，计数 1 万个细胞，结果
使用 Modfit 软件分析。
三、 实验结果
省略
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