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共聚焦显微镜与传统显微镜相比，具有高分辨率、高灵敏度、高放大率等特点。随着软件开发和应用技术的完善，共聚焦显微镜已成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域中新一代强有力的研究工具。
共聚焦显微镜的样品制备共聚焦显微镜样品制备是检测前的关键步骤。样品需经荧光探剂标记(单标、双标、三标)。
标本可以是固定的或活的组织，也可以是固定的或活的贴壁培养，细胞应培养在Confocal专用小培养皿或盖玻片上，悬浮细胞，甩片或滴片后，用盖玻片封片。样品的最大厚度约1~2mm，使用的盖玻片厚度应小于0.17mm，载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间，而且表面光洁，厚度均匀，没有明显的干扰荧光。固定样品常用封片剂进行封片，常用PH8.5-9的PBS配制的甘油封片。
常规样品制备要求：
1、染料的选择
由于共聚焦显微镜是以单一波长的激光作为光源，因此在选择荧光染料时要根据共聚焦显微镜配备的激光器波长选择，如果在同一样品中有多种荧光染料标记，还要考虑它们的发射波长尽量不要重叠，避免串色问题。
2、样品承载物的选择
一般的共聚焦显微镜高倍物镜均为油镜，它的数值孔径较小，要求镜头与样品之间的工作距离不大于0.17mm，因此如果观察样品为贴壁细胞或组织切片，可以用普通的载玻片和盖玻片即可。如果是悬浮细胞或悬浮粒子，可以用共聚焦显微镜专用的培养皿承载样品进行观察。
3、封片剂的选择
如果样品只需要观测一次并且不是极易淬灭的荧光，可以选用一定浓度的甘油混合液封片即可。如果样品需要放置一段时间并多次拍摄，应选用抗荧光淬灭的封片剂，以减少荧光信号丢失。
共聚焦显微镜的操作步骤①根据荧光探针的激发波长和发射波长，选择合适的激光器、激光功率，分光镜滤片和发射滤片。
②确定扫描方式：点、线、面、三维扫描。
③确定扫描密度(分辨率):256×256、512×512、1024×1024、2048×2048，分辨率越高，扫描速度越慢，图像信噪比越好，但也越容易发生光漂白。
④选取共聚焦显微镜物镜的倍数及电子放大倍数:这个条件被确定后，扫描范围即被确定，物镜的光透射率与数值孔径(NA)的4次方成正比，与物镜的放大倍数的平方成反比，因此，应尽量选择高数值孔径的物镜。
⑤根据样品的制备质量选择合适的针孔大小，调整激光管电压、光电倍增管功率、降噪等至最佳状态，这些参数选择或设置有非常密切的关系，选择时应综合考虑。
⑥确定光切范围，即扫描样品的厚度，锁定起始位置和结束位置。
⑦给出光切的层数及取图时累计平均次数。
⑧获取图像并保存。
共聚焦显微镜使用注意事项使用共聚焦显微镜，必须注意以下几点：
①严格按照使用规程操作，不得任意改变操作程序，共聚焦显微镜中的激光发射管使用寿命有限且价格昂贵。所以，在操作使用过程中切记，在开关的启动顺序以及在扫描过程中努力做到保护好激光管。
②注意不要暴露在中等功率和高功率的激光辐射中，特别要注意不得注视激光束，甚至不要观看样品：不得在共聚焦显微镜附近储存或使用易燃易爆物的同体、液体或气体：可以引燃的材料如布或纸张不得放入光路中。
③开机或改变激光功率后，约需20min激光光源才能够达到稳定，关闭共聚焦显微镜系统时，先关闭计算机，等氩离予激光器风扇关闭时，方可关闭系统开关。
④扫描后的图像储存在计算机内，可作进一步处理。由于计算机的硬盘有限，应及时储存到用户软盘上，但要警惕任何病毒浸染激光共聚焦显微系统。使用前要严格把关，检查软盘是否携带病毒。
共聚焦显微镜作为使用率极高的大型精密仪器，它的正常运转离不开科学的日常管理。
1、负责人管理制度
为共聚焦显微镜指定仪器负责人，由专人负责仪器的开关机，规范的开关机对于共聚焦显微镜，尤其是激光器及汞灯的维护极为重要，并由负责人每天检查仪器的运行状态。
2、仪器预约使用
激光器和汞灯均属于耗材性的配件，使用寿命有限。尤其是激光器，价格昂贵，在几万至几十万元不等。充分利用好仪器的开机时间，避免共聚焦显微镜空转显得格外重要。一旦出现超过半小时以上的空档时间，由共聚焦显微镜负责人及时协调仪器使用，通知预约较晚时间点的人员提前使用，避免共聚焦显微镜开机空转造成的浪费。
3、使用光盘或者网盘保存数据
严禁插拔U盘或者硬盘拷贝数据，使用仪器共享管理系统的网盘传输或者光盘刻录数据结果，杜绝病毒侵染共聚焦显微镜系统。
2018-11-30 16:09:56 3995次 http://www.yiqi.com/daogou/detail_1723.html 热门标签：光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。光学显微镜是由一个透镜或几个透镜的组合构成，是人类进入原子时代的标志。
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光学显微镜主要由光学系统及支撑它们的机械结构组成，光学系统包括物镜、目镜和聚光镜，都是由各种光学玻璃做成的复杂化了的放大镜。光学显微镜主要用于放大微小物体，使其为人的肉眼所能看见。
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光学显微镜是一种既古老又年轻的科学工具，从诞生至今，已有三百年的历史。光学显微镜的用途十分广泛，例如在生物学、化学、物理学、天文学等科研工作中都是离不开光学显微镜。
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光学显微镜是一种精密的光学仪器，它广泛应用于现代科学技术和生产的各个领域，是一种十分重要的观测工具。在生物学、医学、农业、畜牧、地质、矿产和一些工业部门内，光学显微镜有特殊的地位，发挥重要的作用。
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光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。主要由载物台、聚光照明系统、物镜、目镜和调焦机组成，被广泛用于多个领域中。
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光学显微镜是一种精密的光学仪器，已有300多年的发展史。自从有了光学显微镜，人们看到了过去看不到的许多微小生物和构成生物的基本单元——细胞，使我们对生物体的生命活动规律有了更进一步的认识。
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