细胞光散射样品的制备细胞仪测定检测显微镜

细胞光散射样品的制备细胞仪测定检测显微镜

  样品的制备
流式细胞仪是测定一个或重复的每个颗粒流经光路的信号。因此，
细胞必须做成单个悬浮状态，不能聚集，且如前部分所述，也不允许有
细胞碎片存在。

  非染色细胞的光散射
一个粒子如细胞出现在一束光线中，立即会干扰该光束，造成该光
束入射光的重分布。该细胞所获能量则以衍射、折射、反射等复杂的参
数形式重新发射出来。这些参数与细胞体积、表面构象、内部结构成函
数关系。市售的流式细胞仪一般只测定两个固定位置的光散射，即低角
前面约10°的光散射及90°的光散射。

一般认为，90°位置的光散射值主要受细胞内部结构所致的光反射
和折射影响，而低角前向(10°)位置的光散射则主要代表细胞大小

流式细胞仪有一整套仪器系统，适用于各种特殊条件下的测试，原
理大同小异。区别仅限于激发光源，光倍增管的敏感性及配置的计算机
不同。

把低功率激光器发出的相干光(Coherentlight)以一条狭窄的光束
聚焦在流动的细胞上，这样可轻而易举地提高分辨率。但要提高敏感性
则必须依赖造价昂贵的大功率激光器才能实现。同时大功率激光器需要
极高功率电源(如多线18W输出功率的氩激光器，每小时耗50KW，即使普
通4W输出功率的激光器，每小时亦耗电12KW之多)。例如小量膜受体免
疫荧光检测，以及需要紫外激发时，均需要高功率的激发光源。氩氪激
光器效率均较低。再者，若希望仪器系统带有可测宽谱带的染料激光器
时，则需配置大功率电源，这样，仪器本身造价也要大大增加。这里需
要补充的是，相对上述那些不利因素而言，如果使用PI染色法检测脊椎
动物细胞内DNA的含量，只需100mW的低能激光器。

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