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TLC(TLC)的薄层分析

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放大字体  缩小字体    发布日期:2020-09-18  浏览次数:79
核心提示:    TLC法是将供试品溶液在薄层板上点样,经展开、检视后得到的色谱图,与合适的对照物按同法得到的色谱图对照,用于药品的

  

  TLC法是将供试品溶液在薄层板上点样,经展开、检视后得到的色谱图,与合适的对照物按同法得到的色谱图对照,用于药品的鉴别或杂质检查。

  一、工具和材料。

  A.薄层板。

  国产薄层玻璃板材要求平滑,平滑,洗净无水珠,干燥。主要固定相有硅胶G,硅胶GF254,硅胶H,硅胶HF254,其次是硅藻土,硅藻土G,氧化铝,氧化铝G,微晶纤维素F254等。它的粒度,一般要求直径5~40微米。

  薄涂层一般分为无粘合剂型和含粘合剂型两种;前者直接将固定相涂布于玻板上,后者将一定量的粘合剂添加到固定相中,一般常用10%~15%锻石膏(CaSO4·2H2O,140℃加热4小时),混匀后加水适量使用,或以羧甲基纤维素钠水溶液(0.2%~0.5%)适量调成糊状,均匀涂布于玻板上。用涂层器涂覆,可使固定相涂覆在玻板上,形成符合厚度要求的均匀薄层。

  市场上销售的薄层板主要有普通薄层板和高效薄层板,如硅胶薄层板,硅胶GF254薄层板,聚酰胺薄膜,铝基薄层板等。

  (2)点样器与纸色谱法相同。

  (3)展开容器应采用适合薄层板尺寸的玻璃薄层色谱法展开筒,其盖紧、底部平整、光滑或有两个凹槽。

  (4)显色剂,见每一品种的规定。可用喷雾显色、浸渍显色或置碘蒸汽显色等方法检测斑点。

  (5)显色装置喷雾显色要求用压缩气体使显色剂呈均匀细密状喷射;可用专用玻璃器皿或适当的玻璃缸代替浸渍显色;用双槽玻璃缸或适当大小的干燥器代替蒸气熏蒸显色。

  (6)显示器为暗盒,装有可见光、短波紫外线(254nm)、长波紫外线(365nm)光源和相应的滤光片,并可附加摄像设备以拍摄图像,暗盒内的光源应具有足够的亮度。

  二、运作方法。

  (1)制备薄层板。

  除另有规定者外,自制的薄层板,将1份固定相和3份水在研钵中单向研磨混合,除去表面的气泡,倒入涂布器中,平滑地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2~0.3mm),取下涂满薄层的玻板,置水台上,于室温下晾干后,在110℃下活化30分钟,即放置一个装有干燥剂的干燥盒备用。在使用之前检查它的均匀性(通过透射光和反射光来检查)。

  市场上销售的薄层板在使用前应在110℃激活30分钟。聚酰胺膜无活性;铝基薄层板可根据需要剪断,但应注意剪断薄层板底边的硅胶层不得有破损。如果贮藏过程中被空气中的杂质污染,使用前可用合适的溶剂向上展开展开预洗剂,110℃激活后,用干燥器备用。

  除另有规定外,用点样器在薄层板上进行点样,一般为圆点,点样基线距底边2.0cm,样点直径2~4mm,点距距可见斑扩散情况以不影响检测为宜,一般为1.0~2.0cm。点样时一定要小心,不要损坏薄层表面。

  (3)展开展开缸如果需要预先加满展开剂,可向缸内加足数量的展开剂,并在壁上贴两张和展开缸一样高和宽的滤纸条,一端浸入展开剂,密封顶盖,使系统平衡或按不同品种进行操作。[医教网络搜集整理]

  把点好的样品的薄层板放入展开器,浸入展开器深度0.5~1.0cm,距薄层板底边距0.5~1.0cm,不要将样品浸入展开器内),密封顶盖,待展开至规定距离(一般10~15cm)后,取出薄层板,晾干,按品种规定检验。

  展布可单向展开,即单向展开;也可双向展开,即先向一个方向展开,然后取出,直到展布完全挥发后,使纸片旋转90°,再用原来的展布或其他的展布;也可多次展开。

  (4)可用荧光猝灭法显色和检测荧光薄层板;可直接检测普通薄层板,例如有色物质;可检测无色物质的物理或化学方法。物理法是检测出斑点的荧光颜色和强度;化学方法一般是用化学试剂显色后,立即盖住同样大小的玻片,进行检测。

  三、系统适应性测试。

  根据每个品种的具体要求,对检测方法进行系统适用性试验,检测斑点的检测灵敏度、比值变化(Rf)和分离效率应符合规范要求。

  检测灵敏度是指杂质检查时,用对照液稀释几倍于供试溶液和对照液在规定的色谱条件下的溶液。

  其次,在同一薄层板上进行点样,展开,观察,前者应显示出明显的斑点。

  (2)比移值(Rf)是指从基线到展斑中心的距离与从基线到展斑前沿的距离之比。

  可以通过计算出供试品溶液中主斑点和对照品溶液中主斑点的比移值来比较,也可以通过比移值来确定主斑点和杂质斑点的位置。

  (3)分离效果鉴别时,对照品与结构类似的药物对照品配制的混合对照溶液应出现明显的分离斑。杂对照品检验时,杂对照品用供试品本身稀释的对照液或同品种对照品溶液溶解制成的混合对照液应有两个明显的杂对照液斑点,或被检验成分与相邻的杂对照品斑点明显分离。[医教网络搜集整理]

  四、鉴定方法。

  (1)鉴别可采用点样、展开和在同一片薄片上检测到的与同一浓度的对照品溶液,供品溶液所显出的主色斑的颜色(或荧光)和位置(Rf)应与对照品溶液的主色斑一致,且主色斑的大小和颜色的深度应大致相同。或者用供试品溶液与对照品溶液等体积混合物,医学教育网收集整理应显示单一、紧密的斑点;或者选择与供试品溶液中化学结构类似的药物对照品与供试品溶液中的主要斑点比较,两者的Rf应不同;或者用上述两种溶液中的体积混合物显示两种清楚分离的斑点。

  杂质检查可采用杂质对光方法,供品溶液自身稀释对照法,或杂质对光方法与供品溶液自身稀释对照法。除主要斑点外,供试品溶液中的其它斑点应与相应对照品溶液或系列对照品溶液中的主要斑点进行比较,或与供试品溶液自身稀释对照溶液或系列自身稀释对照溶液中的主要斑点进行比较,不可进一步加深。

  一般应该规定杂质的斑点数和单杂质量,并且在使用系列本身的稀释对照溶液时,还可以规定估计的总杂质。


 
 
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