环境试样如海水或饮用水的细菌检测

环境试样如海水或饮用水中只有少量的细菌-计量显微镜

  例如，光偏振会导致分子双折射(molecular birefringence)。长的或平的分
子，尤其是聚合大分子，可以清楚地显现出分子双折射，分子双折射特别适合于
检测微生物产生的胞外聚合物。在分子双折射中，当偏振光遇到一系列链状排列
的原子偶极，如在长分子中，偶极力引起光沿着链的纵向振动，在两极处产生了
更大的极性各向异性。然而，分子中的侧链趋向于减少分子主链中的双折射强
度，使极性各向异性减小。样品中呈现的各向异性的模式和强度可指示样品的纯
度和元素结构。

  样品对偏振光效应的分辨率依赖于通过偏光器产生平面偏振光以及用检光器
检测效果。在偏光显微镜中使用两种偏光器:偏光镜和检光镜。偏光镜传递光，
置于光源与镜台下部的聚光透镜之间;检光镜置于物镜和目镜之间。许多偏光器
使用偏振膜制造，如位于两个保护性的薄玻璃片之间的人造偏光板。当来自第一
个偏光镜的偏振光，在允许其通过检光镜的方向振动时，显微镜的视野将变黑，
因为偏光镜光振动的方向是交叉的。这样，在偏光显微镜中，对比度
是整个样品多种干涉现象的结果。晶体中每一点的光干涉和延迟会产生在黑色背
景中的对比度和颜色。Michel-levy干涉光谱基于光通过不同厚度的样品的光延
迟，根据Michel-levy干涉光谱，光干涉可产生一级灰色、高级白色和彩色的样
品影像。

稀释步骤
  提取步骤之后，通过样品的一系列稀释把微生物分成若干单独的再生单元。
无菌水、生理盐水、蛋白陈或磷酸盐缓冲溶液是稀释过程中常用的几种溶剂。尽
管水很方便，也常常被使用，但在稀释过程中它不是首选溶剂，因为水不能防止
稀释过程中的渗透压冲击(osmotic shock).

水样的浓缩步骤

  在一些环境试样如海水或饮用水中只有少量的细菌，因而在计数前需采用浓
缩而不是稀释。在此方法中，用真空装置使特定体积的水通过
膜过滤。这样，细菌就被截留在膜上，有细菌的膜然后被放在琼脂培养基或者浸
泡过培养基的纤维垫上，使其长成单个的菌落，这就是膜过滤技术的基础

为了达到分离和计数的目的，在膜上获得合适浓度的细菌，常常需要过滤不同
体积的水。在这种情况下，选择适合于细菌收集的膜类型和大小是至关重要的，
经常使用网眼为0.45μm的硝化纤维素滤膜。在处理试样的过程中，必须注意
处理时间、真空压、干燥等因素，务必使生物承受的压迫降至最小。

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