荧光显微镜技术常识

荧光显微镜技术常识-显微定量测量荧光显微光度计

荧光显微技术

  在荧光显微镜下，观察和测量物质荧光性的技术，称为荧
光显微技术，在普通显微镜上，装配可以激发荧光和接收荧光
的装置，就能成了荧光显微镜，若配以定量测量装置，则称为
荧光显微光度计。

  荧光显微镜技术有两个核心问题：一是荧光的激发，二中
荧光的接收，所谓荧光的激发，就是能使被观察样品产生足够
的荧光，而荧光的接收，就是使激发光和荧光相分离，获得适
合眼睛观察和光电倍增管接受的清晰明亮的荧光。

  荧光显微镜和配的荧光装置的显微光度计，我国石油、煤
炭和地质部门引进的荧光显微设备以显微光度计为主。

  荧光显微镜地反射条下的工作原理其关键配件及功能如下
：照明光源光源为100W高压汞灯根据斯托克斯法则，物质发射
出的荧光光波的波长总是长于激发光波的波长，为了保证有机
质的发射光谱落在可见光范围内（400-750nm ），在有机质荧
光分析过程中，主要利用汞灯在360-500nm 之间的三条强的谱
线，即365nm 、405nm 和435nm.双光束分光器荧光显微镜与普
通显微镜的重要区别之一，就是在垂直照明器中，用双光束分
光器代替直角棱镜，双光束分光器为一种透明的镜片，分光镜
片的一特定的临界值，波长大于临界值的光波可以通过，波长
小于临界值的光波被反射。例如，常用的比光束分光器的临界
值为430nm ，也就是说波长小于430nm 的激发光被反射，通过
物镜到达样品，而样品发射的荧光被物镜接收后到达双光束分
光器，由于样品的荧光波长大于430nm ，因而能通过双光束分
光器到达目镜，双光束分光器的临界值总是要大于激发光波的
波长值。

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