孢子不易被染色许提升染色通透

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孢子不易被染色许提升染色通透-显微镜高倍油镜观察
内孢子染色(Endospore staining)
一、目的：利用鉴别染色技术，将产生内孢子之细菌细胞及内孢子或游离孢子予以染色区别。
细菌细胞(繁殖体)→内孢子(endospore 绿色)→游离孢子(free spore)

二、原理：孢子不易被染色，透过加热(80℃)，提升染色通透性，无菌体细胞可被水脱色，
再利用番红覆染，使细菌细胞呈红色，内孢子呈绿色。
三、材料： 
1.显微镜  2.拭镜纸 3.酒精灯  4.接种环 5.染色盘  6.载玻片 7.蒸馏水
8.95%酒精 9.洋杉油  10.二甲苯 11.水浴槽  12.玻片夹 13.镊子 
14.内孢子染料：○1孔雀绿(初染剂) ○2番红染剂
15.菌种：  ○1Escherichia coli (E.coli)大肠杆菌  ○2Bacillus subtilis 枯草杆菌
二、方法：
1. slide 洗净烘干备用  2. 取1 loop 菌液于slide 涂开
3. 烘干固定  4. 加初染剂孔雀绿覆盖菌膜
5. 80℃水浴加热5~6min(初染剂不可干掉)
6. 放冷，背面水洗  7. 加番红染剂30sec
8. 背面水洗  9. 拭干，显微镜高倍油镜观察  10. 画图并纪录之