ELISA常用方法优缺点解析_91化工仪器网

   相信经常用elisa试剂盒做实验的人都知道，有四种常用的方法来检测，他们分别是直接法、间接法、双抗体夹心法和竞争法。今天的文章中，将为大家一一解析其方法的优点与缺点。

 1.直接法（direct ELISA） 将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。

   优势：操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。
   缺点：试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。 
 
   2.间接法（indirect ELISA） 此测定方法与直接法类似，差别在于一级抗体没有酶标记，改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
   优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它zui多的免疫反应性。
   缺点：交互反应发生的机率较高。 

   3.双抗体夹心法（sandwich ELISA） 被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量；或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取，才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。
   优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。
   缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。 

   4.竞争法（competitive ELISA） 样本里的抗原（自由抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一起竞争相同的抗体，当样品里的自由抗原越多，就可以结合越多的抗体，而固定抗原就只能结合到较少的抗体，反之亦然。经清洗步骤，洗去自由抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较，根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。
   优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。
   缺点：整体的敏感性和专一性都较差。

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