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三步法（以 SP 试剂盒为例）
1. 石蜡切片脱蜡至水。
2. 蒸馏水冲洗， PBS 浸泡 5 分钟，如需采用抗原修复，可在此步后进行。
3. 3%H2O2 室温孵育 5~10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS 冲洗，2 分钟 3 次。
4. 5~10% 正常山羊血清封闭，室温孵育 10 分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃ 孵育 1~2 小时或 4℃ 过夜。
5. PBS 冲洗，2 分钟 3 次。
6. 滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PBS 稀释），37℃ 孵育 10~30 分钟；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃ 或室温孵育 10~20 分钟。
7. PBS 冲洗，2 分钟 3 次。
8. 滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素（ PBS 稀释），37℃ 孵育 10~30 分钟；或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃ 或室温孵育 10~20 分钟。
9. PBS 冲洗，2 分钟 3 次。
10. 显色剂显色（ DAB 或 AEC）。
11. 自来水充分冲洗，复染，脱水透明（如需要）、封片。
二步法（以 PV-9000 通用型二步法检测试剂盒为例）
1. 石蜡切片脱蜡至水。
2. 蒸馏水冲洗，PBS 浸泡 5 分钟，如需采用抗原修复，可在此步后进行。
3. 3% H2O2 室温孵育 5~10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS 冲洗，2 分钟 3 次。
4. 滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃ 孵育 1~2 小时或 4℃ 过夜。
5. PBS 冲洗，2 分钟 3 次。
6. 滴加试剂 1（Polymer Helper），室温或 37℃ 孵育 20 分钟，PBS 或 TBS 冲洗，2 分钟 3 次。
7. 滴加试剂 2（poly peroxidase-anti-mouse/rabbit IgG），室温或37℃ 孵育 20~30 分钟，PBS 或 TBS 冲洗，2 分钟 3 次。
8. PBS 冲洗，2 分钟 3 次。
9. 显色剂显色（DAB 或 AEC）。
10. 自来水充分冲洗，复染，脱水透明（如需要）、封片。
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石蜡切片免疫组化染色步骤你了解吗?-技术文章-上海古朵生物科技有限公司
核心提示：三步法（以 SP 试剂盒为例） 1. 石蜡切片脱蜡至水。 2. 蒸馏水冲洗， PBS 浸泡 5 分钟，如需采用抗原修复，可在此步后进行。 3. 3%H2O2 室温孵育 5~10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS 冲洗，2 分钟 3 次。 4. 5~10% 正常山羊血清封闭，室温孵育 10 分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃ 孵育 1~2 小时或 4℃ 过夜。 5. PBS 冲洗，2 分钟 3 次。 6. 滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PBS 稀释），
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