手机版|
二维码|
商品货号：MS1001
英文名称：Micro Lacate Dehydrogenase（LDH）Assay Kit
别名：乳酸脱氢酶试剂盒 LDH Kit 乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒
检测方法：微量法
商品货号：商品品牌：规格基本售价选择规格MS1001-100管/48样索桥生物100管/48样￥330.00元
产品详细介绍 产品说明书
测定意义：
LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。
测定原理：
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
货号：MS1001 规格：100管/48样
乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。
测定原理：
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：60mL 1瓶， 4℃保存；
试剂一：液体5mL 1瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂 1支，-20℃保存，用时加入1.3 mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂
分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：液体5 mL 1瓶，4℃避光保存；
试剂四：液体20mL 1瓶，4℃保存；
样品测定的准备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为1000~5000：1的比例（建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。2、样本测定（在EP管中加入下列试剂）
试剂名称( L)
测定管
对照管
样本
10
10
试剂一
50
50
试剂二
10
蒸馏水
10
充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴15min
试剂三
50
50
充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴15min
试剂四
150
150
充分混匀，室温静置15min， 450 nm下测定吸光度，计算 A=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照管。
LDH活力单位的计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归曲线， y = 0.725x (x为标准品浓度， mol/mL；y为对吸光度)。
2、血清（浆）LDH活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/mL）= A 0.725 T 103=92 A
3、细胞、细菌和组织中LDH活力的计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/mg prot）=[ A 0.725 V1] (V1 Cpr) T 103 =92 A Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/g鲜重）=[ A 0.725 V1] (W V1 V2) T 103 =92 A W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/104 cell）= [ A 0.725 V1] (2000 V1 V2) T 103 =0.046 A
V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，15 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；2000：细胞或细菌总数，2000万；103：1umol/mL=103 nmol/mL。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
1、标准条件下测定的回归曲线， y = 0.3625x (x为标准品浓度， mol/mL；y为对吸光度)。
2、血清（浆）LDH活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/mL）= A 0.3625 T 103=184 A
3、细胞、细菌和组织中LDH活力的计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/mg prot）=[ A 0.3625 V1] (V1 Cpr) T 103 =184 A Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/g鲜重）=[ A 0.3625 V1] (W V1 V2) T 103 =184 A W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/104 cell）= [ A 0.3625 V1] (2000 V1 V2) T 103 =0.092 A
V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，15 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；2000：细胞或细菌总数，2000万；103：1umol/mL=103 nmol/mL。
辅酶Ⅰ系列 QS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样500MS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法100管/48样920QS1001乳酸脱氢酶（LDH）测试盒可见分光光度法50管/24样170MS1001乳酸脱氢酶（LDH）测试盒微量法100管/48样330QS1002NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒紫外分光光度法50管/48样280MS1002NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒微量法100管/96样550QS1003NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒紫外分光光度法50管/48样320MS1003NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒微量法100管/96样600QS1004NADH氧化酶（NOX）测试盒 可见分光光度法50管/48样450MS1004NADH氧化酶（NOX）测试盒 微量法100管/96样850QS1005-50柠檬酸合酶(CS）测试盒可见分光光度法50管/48样3200QS1005-25柠檬酸合酶(CS）测试盒可见分光光度法25管/24样2000MS1005柠檬酸合酶(CS）测试盒微量法100管/48样3500QS1006丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒紫外分光光度法50管/48样720MS1006丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒微量法100管/96样1400QS1007醇脱氢酶（ADH）测试盒紫外分光光度法50管/48样280MS1007醇脱氢酶（ADH）测试盒微量法100管/96样550QS1008单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒紫外分光光度法50管/48样800MS1008单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒微量法100管/96样1550QS1009乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒紫外分光光度法50管/48样420MS1009乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒微量法100管/96样800QS1010NAD激酶（NADK）测试盒可见分光光度法50管/48样600MS1010NAD激酶（NADK）测试盒微量法100管/48样1100QS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 紫外分光光度法25管/24样1280MS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 微量法100管/96样2500
关注本网官方微信 随时阅读专业资讯
